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免疫組化（IHC）是利用抗原與抗體的特異性結(jié)合原理和特殊的標(biāo)記技術(shù)，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體顯色，對(duì)組織細(xì)胞內(nèi)的特異性抗原進(jìn)行定位、定性、定量檢測(cè)的一門技術(shù)。本文主要總結(jié)二抗原理及其特點(diǎn)，以提供更好的選擇。
IHC常用酶標(biāo)二抗原理圖
1. SABC法
原理：SABC法是利用鏈酶親和素(Streptavidin)與生物素(Biotin)*的高度親和力這一生物學(xué)性質(zhì)，先將生物素與辣根過氧化物酶(HRP)結(jié)合，形成生物素化HRP，然后與鏈酶親和素按一定比例混合，形成SABC復(fù)合物。用生物素化二抗與第一抗體結(jié)合，再與SABC復(fù)合物聯(lián)結(jié)形成抗原～抗體～生物素化二抗～ SABC復(fù)合物。最后用底物顯色劑顯色。
特點(diǎn)：該法具有靈敏度高以及低背景染色等特點(diǎn)。
2. SP法
原理：根據(jù)生物素(Biotin) 與鏈霉親和素(Streptavidin)具有強(qiáng)結(jié)合力的原理設(shè)計(jì)。在一抗（兔源與鼠源）與相應(yīng)的靶抗原結(jié)合后，生物素化標(biāo)記的抗多價(jià)二抗與一抗特異結(jié)合；二抗上標(biāo)記的生物素與標(biāo)記了辣根過氧化物酶（HRP）的鏈霉親和素結(jié)合，形成抗原～特異性一抗～生物素化的二抗～HRP 標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物。
特點(diǎn)：該法孵育時(shí)間短（通常為10min），靈敏度高以及低背景染色等特點(diǎn)。
3. Polymer酶標(biāo)二抗法
原理：該法采用一段多聚氨基酸聚合物做為載體鏈，將該多聚物與二抗結(jié)合，然后可再標(biāo)記上多個(gè)HRP/AP酶分子，所以同樣具有很高的信號(hào)放大作用。
特點(diǎn)：靈敏度高；操作步驟簡(jiǎn)單；無需進(jìn)行內(nèi)源性的生物素封閉。
4. 直接酶標(biāo)二抗法
該法是將HRP/AP酶分子直接標(biāo)記于二抗上。因此需要普通的酶標(biāo)二抗即可完成。實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)單，成本低，但是因?yàn)闆]有信號(hào)放大作用，所以對(duì)很多表達(dá)豐度不是很高的抗原就可能檢測(cè)不到。
