3T3-L1(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞)品牌細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3T3-L1(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞)品牌細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
 
293A，人胚腎上皮細(xì)胞系（腺病毒包裝級(jí)別）大鼠小鼠雜合神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞

HIC(人小腸細(xì)胞)苜蓿中華根瘤菌

蛹蟲(chóng)草 Cordyceps millitaris黑化大家鼠肺成纖維樣細(xì)胞

球毛殼 Chaetomium globosum萎芽孢桿菌 Bacillus atrophaeus

人輸尿管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基COLO 320DM(人結(jié)直腸腺細(xì)胞)

中間葡萄球菌 Staphylococcus intermedius狀絲孢酵母 Trichosporon capitatum

粟酒裂殖酵母 Schizosaccharomyces pombe戊糖桿菌 Lactobacillus pentosus

中慢生華癸根瘤菌 Mesorhizobium huakuii解脂亞羅酵母 Yarrowia lipolytica

L-Glutamine大鼠小腸血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基

黃孢原毛平革菌 Phanerochaete chrysosporium香菇 Lentinula edodes

人支氣管平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基宮頸

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae無(wú)花果曲霉 Aspergillus ficuum

微白色放線菌轉(zhuǎn)換變種 Actinomyces albidus人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基
3T3-L1(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞)品牌1 kit (100 purifications)High Pure Viral RNA Kit

5×100反應(yīng)(20 μl)LightCycler 480 High Resolution Melting Master

10×500反應(yīng)(20 μl)LightCycler 480 Probes Master, 10 x 5 ml

5×100反應(yīng)(20 μl)LightCycler 480 Probes Master, 5 x 1 ml

10×500反應(yīng)(20 μl)LightCycler 480 SYBR Green I Master, 10 x 5 ml

5×100反應(yīng)(20 μl)LightCycler 480 SYBR Green I Master, 5 x 1 ml

Kit for 1000 reactions(20 µl)LightCycler® Multiplex RNA Virus Master, 1000

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