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首頁>產(chǎn)品中心>熒光PCR檢測試劑盒>熒光PCR定量試劑盒>50T禽腦脊髓炎病毒(AEV)檢測試劑盒說明書

禽腦脊髓炎病毒(AEV)檢測試劑盒說明書

簡要描述:

禽腦脊髓炎病毒(AEV)檢測試劑盒說明書的相關(guān)產(chǎn)品:phospho-MEK1/MAP2K1(Thr292) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶1抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-MAPK8/MAPK9( Thr183+Tyr185) 磷酸化氨基末端激酶2抗體 規(guī)格: 0.1ml
Goat anti-human IgG whole serum 羊抗人IgG抗清 規(guī)格: 1ml
TFPI/LACI

更新時(shí)間:2025-07-02

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禽腦脊髓炎病毒(AEV)檢測試劑盒說明書

操作流程:

收集基因信息——>設(shè)計(jì)引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細(xì)胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測序——>測序結(jié)果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質(zhì)粒實(shí)物保存。

特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號(hào)

禽腦脊髓炎病毒(AEV)檢測試劑盒說明書

50T

FS-01H4249

 


操作流程.jpg

 

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:

方法

1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer

5 μl     dNTP mix (2mM)

4 μl     引物1(10pM)

2 μl     引物2(10pM)

2 μl     Taq酶 (2U/μl)

1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)

1 μl      加ddH2O至 50 μl

產(chǎn)品特點(diǎn):

◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴(kuò)增;

◇高靈敏度:檢測靈敏度可達(dá)10~100拷貝;

◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測;

◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR:

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限,實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度,并記錄在電腦軟件之中,通過對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的:

1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí),剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期(對(duì)數(shù)期),此時(shí)微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增,得到的Ct值是恒定的。

2)Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測定,因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。

外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,重現(xiàn)性定量方法,已得到的*,廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。

定量PCR方法:

a、競爭法

選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中,待測樣品與競爭模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增(其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記)。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強(qiáng)度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。

b、內(nèi)參照法

在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí),內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強(qiáng)度,以內(nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測

綿馬貫眾 規(guī)格: 1g

10453-86-8芐呋;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 規(guī)格: 0.1g

67-47-05-羥甲基 規(guī)格: 20mg

16844-71-6表木栓 規(guī)格: 10mg

87818-31-3環(huán)庚草;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 規(guī)格: 0.1g

6020-18-4化黃連 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/vial

117570-53-35,6-二甲基呫噸-4-乙 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg

38647-11-9內(nèi)酯 規(guī)格: 10mg

545-47-1羽扇豆 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg

禽腦脊髓炎病毒(AEV)檢測試劑盒說明書Goat Anti-Mouse IgG/Cy7  Cy7標(biāo)記的羊抗小鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

TrK A/NTRK1  激A抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-14-3-3 protein zeta/delta(Ser58)  磷化14-3-3 α/β/ζ抗體 0.1ml

C2orf18/ANT2BP  2號(hào)染色體開放閱讀框18抗體 規(guī)格: 0.2mlAPOC3  載脂C3抗體 規(guī)格: 0.2ml

Periostin  成骨細(xì)胞特異性因子2抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit anti-MG IgG/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗爪沙鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

TREM1  髓系細(xì)胞觸發(fā)受體1抗體 規(guī)格: 0.2ml

NPAP1  核孔1抗體 規(guī)格: 0.2ml

PCK2  磷羧化2抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-MAP3K8/Tpl2 (Thr290)  磷化絲裂原活化激激8抗體 規(guī)格: 0.1ml

Jak3  激JAK-3抗體 規(guī)格: 0.1mlPAP2B  磷脂磷2b抗體 規(guī)格: 0.1ml

CXXC5  二硫鍵氧化還原鋅指5抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-SRC-3 (Thr24)  磷化類固受體輔助活化因子-3 規(guī)格: 0.1ml

galectin 9  半糖凝集9抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rabbit Anti-Biotin/APC  APC標(biāo)記的兔抗抗體IgG 規(guī)格: 0.1ml

使用方法:

一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。

1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。

3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽性對(duì)照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品 DNA 的制備

7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。

8. 如果有 N 個(gè)樣品,則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取,多出的一個(gè)用作樣品制備陽性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。

三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),1 個(gè)用于PCR 陽性對(duì)照。

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